الکتروفورز افقی

مراحل انجام الکتروفورز افقی به شرح زیر است:

• تهیه ژل آگارز: پودر آگارز را در بافر حل کرده و گرم می‌کنند تا به طور کامل حل شود. سپس، ژل را به یک قالب ریخته و اجازه می‌دهند تا سفت شود.
• بارگذاری نمونه‌ها: نمونه‌ها را در چاهک‌هایی که در ژل ایجاد شده است، بارگذاری می‌کنند.
• اعمال جریان الکتریکی: الکترودهای مثبت و منفی را به دو انتهای ژل وصل می‌کنند. یک جریان الکتریکی اعمال می‌شود که باعث حرکت مولکول‌ها در ژل می‌شود.
• جداسازی مولکول‌ها: مولکول‌ها بر اساس اندازه و بار آنها از طریق ژل جدا می‌شوند.
• مشاهده نتایج: پس از خاموش شدن جریان الکتریکی، می‌توان باندهای مولکول‌های جدا شده را با رنگ آمیزی یا استفاده از نور UV مشاهده کرد.

کاربردهای آن

• تجزیه و تحلیل اندازه DNA: الکتروفورز افقی یک روش رایج برای تعیین اندازه قطعات DNA است. برای این کار، از یک نردبان DNA به عنوان استاندارد استفاده می‌شود. نردبان DNA مخلوطی از قطعات DNA با اندازه‌های شناخته شده است. با مقایسه باندهای نمونه با باندهای نردبان DNA، می‌توان اندازه قطعات DNA را تخمین زد.
• آزمایش Southern blot: الکتروفورز افقی را می‌توان برای انتقال DNA از ژل به یک غشاء نیتروسلولوزی استفاده کرد. این روش در آزمایش Southern blot برای شناسایی قطعات DNA خاص در یک نمونه DNA استفاده می‌شود.
• تجزیه و تحلیل بیان ژن: الکتروفورز افقی را می‌توان برای بررسی بیان ژن استفاده کرد. برای این کار، از RNA استخراج شده از سلول‌ها استفاده می‌شود. RNA به DNA ترجمه می‌شود و سپس DNA بر روی ژل الکتروفورز می‌شود. باندهای روی ژل نشان دهنده ژن‌هایی هستند که در سلول‌ها بیان می‌شوند.
• تجزیه و تحلیل پروتئین: الکتروفورز افقی را می‌توان برای جداسازی و شناسایی پروتئین‌ها استفاده کرد. برای این کار، از ژل‌های حاوی مواد شیمیایی که با پروتئین‌ها باند می‌شوند، استفاده می‌شود.

مزایا

• ساده و آسان برای انجام
• حساس
• مقرون به صرفه
• چند منظوره

معایب

• کندتر از الکتروفورز عمودی
• وضوح کمتری نسبت به الکتروفورز عمودی دارد
• برای جداسازی مولکول‌های بسیار بزرگ مناسب نیست

در مجموع، الکتروفورز افقی یک تکنیک آزمایشگاهی قدرتمند و متنوع است که برای جداسازی و تجزیه و تحلیل انواع مختلف مولکول‌ها استفاده می‌شود.