Trypsin-EDTA (1X)

Trypsin-EDTA(1X) یا تریپسین، سرین پروتئازی است که از پانکراس خوک گرفته می‌شود. این آنزیم تریپسین یک پروتئین تک زنجیره حاوی 223 اسید آمینه است که محل اصلی فعالیت آن زنجیره جانبی دارای لیزین و آرژنین با بار مثبت است. تریپسین-EDTA (1X) یک محلول آنزیمی است که به طور گسترده در زیست‌شناسی سلولی و بافت‌شناسی برای جداسازی سلول‌ها از سطح ظرف کشت سلول یا یکدیگر استفاده می‌شود.

عملکرد Trypsin-EDTA(1X)

تریپسین غالبا زنجیره‌های پپتیدی را از سمت عامل کربوکسیل لیزین و آرژنین می‌شکند (مگر اینکه بعد از آنها پرولین قرار داشته باشد). تریپسین بطور شایع برای جدا کردن سلول‌های چسبیده به فلاسک محیط کشت و همچنین جدا کردن سلول‌ها از هم استفاده می‌شود. تریپسین-EDTA (1X) یک ترکیب آنزیمی است که در زیست‌شناسی سلولی به طور گسترده مورد استفاده قرار می‌گیرد.

دو جزء اصلی تشکیل Trypsin-EDTA(1X)

• تریپسین: یک آنزیم پروتئولیتیک است که پروتئین‌هایی را که سلول‌ها را به یکدیگر یا به سطح کشت متصل می‌کنند، تجزیه می‌کند.
• EDTA: یک عامل شلاته‌کننده (chelating agent) است که یون‌های فلزی مورد نیاز برای اتصالات سلولی را حذف می‌کند.

کاربرد آنزیم تریپسین

Trypsin-EDTA(1X) یا تریپسین همچنین می‌تواند باعث شکست پیوندهای استری و آمیدی در مشتقات سنتتیک اسیدهای آمینه شود. همچنین EDTA (اتیلن دی آمین تترا استیک اسید) به عنوان عامل شلاته کننده اغلب برای افزایش فعالیت آنزیماتیک تریپسین افزوده می‌شود. EDTA از طریق خنثی کردن یون‌های کلسیم و منیزیم که باعث افزایش اتصال سلول به سلول می‌شوند عمل می‌کند. از جمله کاربردهای آن، Trypsin-EDTA می‌تواند برای تولید خطوط تک سلولی برای تحقیقات سلول‌های بنیادی استفاده شود.

این محصول، تریپسین 0.25 درصد و EDTA در بافر فسفات سالین دالبکو است.

• پاساژ سلولی: رایج‌ترین کاربرد تریپسین-EDTA برای جدا کردن سلول‌هایی است که به سطح ظرف کشت چسبیده‌اند. این کار به محققان اجازه می‌دهد تا سلول‌ها را به ظرف جدیدی منتقل کنند و کشت سلولی را ادامه دهند.
• تهیه سوسپانسیون سلولی: این محلول برای تهیه سوسپانسیون سلولی از بافت‌های مختلف نیز استفاده می‌شود.
• جدا کردن سلول‌های اولیه: تریپسین-EDTA می‌تواند برای جدا کردن سلول‌های اولیه از بافت‌های حیوانی استفاده شود.

تریپسین برای تفکیک سلولی

برای تفکیک تک لایه‌های سلولی، محلول Trypsin-EDTA برای اکثر رده‌های سلولی چسبنده مناسب نیست برای سلول های چسبیده به فلاسک محیط کشت مناسب است. این محصول برای کشت سلولی، رشد سلولی و زنده ماندن کاربرد دارد. لطفاً به پروتکل عمومی برای استفاده از محلول ATCC® Trypsin-EDTA مراجعه کنید.

مزایای استفاده از تریپسین-EDTA (1X)

• جدا کردن سلول‌ها: مهم‌ترین کاربرد تریپسین-EDTA جدا کردن سلول‌های چسبیده به سطح کشت از یکدیگر و از سطح ظرف کشت است. این کار به منظور پاساژ دادن سلول‌ها و افزایش تعداد آن‌ها در کشت سلولی انجام می‌شود.
• افزایش کارایی جدا شدن سلول‌ها: حضور EDTA در این ترکیب باعث می‌شود که پیوندهای بین سلولی و سلول-زیرلایه ضعیف‌تر شده و جداسازی سلول‌ها با سرعت و سهولت بیشتری انجام شود.
• حفظ حیات سلولی: با استفاده از غلظت مناسب تریپسین و زمان انکوباسیون کوتاه، می‌توان سلول‌ها را بدون آسیب رساندن به آن‌ها از هم جدا کرد.
• سادگی استفاده: تریپسین-EDTA به صورت آماده و در غلظت‌های مختلف در دسترس است و استفاده از آن بسیار ساده است.

نکات مهم در استفاده از تریپسین-EDTA (1X)

• زمان تماس: زمان تماس تریپسین با سلول‌ها بسیار مهم است. تماس طولانی مدت می‌تواند به سلول‌ها آسیب برساند.
• غلظت: غلظت تریپسین-EDTA نیز باید بهینه شود. غلظت‌های بالا می‌توانند به سلول‌ها آسیب برسانند.
• نوع سلول: حساسیت سلول‌ها به تریپسین متفاوت است. برخی از سلول‌ها به تریپسین حساس‌تر هستند و نیاز به شرایط ملایم‌تری دارند.
• دمای نگهداری: تریپسین-EDTA باید در دمای مناسب نگهداری شود تا فعالیت آن حفظ شود.

به طور خلاصه، تریپسین-EDTA (1X) یک ابزار ضروری در آزمایشگاه‌های کشت سلولی است. با استفاده صحیح از این محلول، می‌توان سلول‌ها را به راحتی از یکدیگر جدا کرد و کشت سلولی را با موفقیت انجام داد.