محیط کشت RPMI 1640

محیط کشت RPMI 1640 اولین بار برای کشت سلول‌های لوسمی انسان در محیط معلق و محیط کشت تک لایه استفاده شد. این محیط برای کشت انواع مختلف سلول‌های پستانداران از جمله Hela، Jurkat, MCF-7 PC12, PBMC، آستروسیت‌ها و کارسینوما مناسب است. ویژگی منحصر به فرد محیط کشت RPMI 1640، داشتن گلوتاتیون بعنوان عامل احیاکننده و همچنین مقادیر زیاد ویتامین‌ها است.

محیط کشت RPMI 1640

RPMI 1640 یک نوع محیط کشت سلولی است که به طور گسترده در آزمایشگاه‌های زیست‌شناسی سلولی و مولکولی استفاده می‌شود. این محیط برای اولین بار توسط موسسه تحقیقات پزشکی Roswell Park Memorial Institute توسعه یافت و به همین دلیل به این نام نامگذاری شده است.

محتویات محیط کشت RPMI 1640

این محیط کشت حاوی بیوتین، ویتامین B12، و پاراآمینوبنزوئیک اسید است که در محیط کشت (Eagle’s Minimal Essential Medium) EMEM یا (Dulbecco’s Modified Essential Medium) DMEM وجود ندارند. علاوه بر این، اینوزیتول و کولین نیز در مقدار زیاد در این محیط کشت وجود دارند. محیط کشت RPMI 1640 فاقد هر گونه پروتئین، لیپید یا فاکتورهای رشد است.

مکمل های محیط کشت RPMI 1640

بنابراین، این محیط کشت نیازمند مکمل است که معمولا این مکمل، سرم جنین گاوی (FBS) 10 درصد است. در این محیط کشت از بافر بیکربنات سدیم (با غلظت 2 گرم در لیتر) استفاده می‌شود و بنابراین برای حفظ pH فیزیولوژیک آن نیازمند 10-5 درصد دی اکسید کرین در محیط است. این محصول (BI-1006) بطور اختصاصی حاوی گلوتامکس/ ال-گلوتامین، 15 میلی مولار HEPES، بی کربنات سدیم و فنل رد است. برای حفظ بهتر pH فیزیولوژیک در غلظت‌های مختلف دی اکسید کربن، محلول HEPES (هیدروکسیل-پیپرازین اتان سولفونیک اسید)، بعنوان یک عامل بافری شیمیایی زوئیترونیک به محیط اضافه شده است.

ترکیب محیط کشت RPMI 1640

این محیط حاوی ترکیبی از مواد مغذی ضروری برای رشد و تکثیر سلول‌های پستانداران است. این مواد شامل:

• آمینو اسیدها: بلوک‌های سازنده پروتئین‌ها
• ویتامین‌ها: برای عملکردهای متابولیکی سلول ضروری هستند
• گلوکز: منبع اصلی انرژی برای سلول‌ها
• نمک‌های معدنی: برای حفظ فشار اسمزی و pH مناسب محیط
• بافر: برای حفظ pH ثابت محیط کشت

انواع RPMI 1640

• RPMI 1640 با گلوتامین: حاوی آمینو اسید گلوتامین است که یک منبع انرژی مهم برای سلول‌ها است.
• RPMI 1640 بدون گلوتامین: برای کاربردهایی که نیاز به کنترل دقیق غلظت گلوتامین دارند استفاده می‌شود.
• RPMI 1640 با HEPES: حاوی بافر HEPES است که برای حفظ pH محیط کشت در شرایط مختلف بسیار مفید است.

نکته مهم: برای کشت موفق سلول‌ها، علاوه بر انتخاب محیط کشت مناسب، باید عوامل دیگری مانند دما، رطوبت، میزان دی‌اکسید کربن و سرم جنین گاوی را نیز به دقت کنترل کرد.

ویژگی‌ های منحصر به فرد RPMI 1640

• غلظت بالای ویتامین‌ها: این محیط حاوی مقادیر بالایی از ویتامین‌هایی مانند بیوتین، ویتامین B12 و پاراآمینوبنزوئیک اسید است که در برخی دیگر از محیط‌های کشت وجود ندارد.
• وجود گلوتاتیون: گلوتاتیون یک آنتی‌اکسیدان قوی است که از سلول‌ها در برابر آسیب‌های اکسیداتیو محافظت می‌کند.
• pH قلیایی: pH این محیط کمی بالاتر از pH خنثی است که برای برخی از انواع سلول‌ها مناسب‌تر است.

کاربردهای محیط کشت RPMI 1640

•  هیبریدوما: این محیط برای تولید پادتن‌های مونوکلونال بسیار مناسب است.
•  لنفوسیت: برای مطالعه سیستم ایمنی و بیماری‌های مرتبط با آن استفاده می‌شود.
•  سرطانی: برای بررسی مکانیسم‌های سرطان و توسعه داروهای ضد سرطان
•  عصبی: برای مطالعه بیماری‌های عصبی و توسعه درمان‌های جدید
•  بنیادی: برای مطالعه فرایندهای تمایز سلولی و مهندسی بافت

مزایای محیط کشت RPMI 1640

محیط کشت RPMI 1640 یکی از محیط‌های کشت سلولی پرکاربرد و محبوب است که به دلیل ترکیبات خاص و کارایی بالایی که دارد، در بسیاری از آزمایشگاه‌های تحقیقاتی و صنایع بیوتکنولوژی مورد استفاده قرار می‌گیرد. از جمله مزایای این محیط کشت می‌توان به موارد زیر اشاره کرد:

• تغذیه کامل سلول‌ها: RPMI 1640 حاوی طیف وسیعی از آمینواسیدها، ویتامین‌ها، نمک‌های معدنی و سایر مواد مغذی ضروری برای رشد و تکثیر سلول‌های پستانداران است. این محیط کشت به سلول‌ها اجازه می‌دهد تا به طور مؤثر رشد کرده و عملکرد طبیعی خود را حفظ کنند.
• پشتیبانی از انواع مختلف سلول‌ها: این محیط کشت برای کشت انواع مختلف سلول‌های پستانداران از جمله سلول‌های چسبنده و شناور مناسب است. به عنوان مثال، از RPMI 1640 برای کشت سلول‌های هیبریدوما، سلول‌های خونی، لنفوسیت‌ها و برخی سلول‌های توموری استفاده می‌شود.
• pH مناسب: RPMI 1640 دارای pH قلیایی ملایمی است که برای رشد بسیاری از سلول‌ها مناسب است. این pH به حفظ فعالیت آنزیم‌های سلولی و عملکرد صحیح غشا کمک می‌کند.
• حاوی گلوتامین: گلوتامین یکی از مهم‌ترین آمینواسیدها برای رشد سلول‌ها است. RPMI 1640 حاوی مقدار کافی گلوتامین است که نیاز سلول‌ها را به این آمینواسید تأمین می‌کند.
• وجود بافر HEPES: برخی از فرمولاسیون‌های RPMI 1640 حاوی بافر HEPES هستند که به حفظ pH محیط کشت در شرایط مختلف کمک می‌کند. این امر به ویژه برای سلول‌هایی که در برابر تغییرات pH حساس هستند، اهمیت دارد.
• سهولت استفاده: RPMI 1640 به صورت آماده یا به صورت پودر قابل تهیه است و استفاده از آن بسیار ساده است.

به طور کلی، محیط کشت RPMI 1640 به دلیل ترکیب متعادل مواد مغذی، pH مناسب و توانایی پشتیبانی از انواع مختلف سلول‌ها، یک انتخاب عالی برای کشت سلول‌های پستانداران در بسیاری از کاربردهای تحقیقاتی و صنعتی است.